双链特异性核酸切割酶等温循环扩增结合 高效液相色谱高灵敏检测双目标microRNA

• 作者: 祁桐 宋畅 陈文慧 唐良秀 鞠嘉和 沈薇 孔德昭 唐盛
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: microRNA 双目标测定 荧光 双链特异性核酸切割酶 酶循环等温扩增 高效液相色谱
• 年，卷（期）: 2021,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 216-225
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19756/j.issn.0253-3820.201298

摘要

通过双链特异性核酸切割酶(DSN)循环扩增策略结合高效液相色谱(HPLC)法,实现了对两种疾病标志物microRNA(miRNA)的选择性分离和高灵敏检测.采用酶循环等温扩增策略增强了目标miRNA的信号,提高了HPLC法检测核酸的灵敏度.利用固定在磁珠上的不同长度和碱基序列的DNA探针实现了不同miRNA信号的色谱分离,磁性分离使背景噪音最小化,动态范围扩大.对目标miRNA-155的检出限为0.30 fmol/L,对miRNA-21的检出限为0.24 fmol/L.将本方法用于检测红斑狼疮、宫颈癌和卵巢癌血清样本中的miRNA-155和miRNA-21,结果与实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)结果相当.