麦长管蚜miRNA实时荧光定量PCR内参基因的筛选

• 作者: 杨超霞 闫艺 张方梅 朱勋 张云慧 李祥瑞
• 来源期刊: 昆虫学报
• 关键词: 麦长管蚜 内参基因 miRNA 表达稳定性 qRT-PCR
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 生理与生化|Physiology and Biochemistry
• 页码范围: 439-448
• 页数: 10页
• 分类号: Q966
• 语种: 中文
• DOI: 10.16380/j.kcxb.2021.04.003

摘要

[目的]筛选特定条件下麦长管蚜Sitobion avenae稳定表达的微小RNA(miRNA)表达分析内参基因.[方法]根据麦长管蚜miRNA Illumina测序结果筛选出miR-10-3p,miR-993,miR-276,miR-275,miR-252a,miR-1,miR-375,pc-15,pc-73和1个常用内参基因U6共10个候选内参基因.利用qRT-PCR测定10个候选内参基因在麦长管蚜有翅蚜和无翅蚜不同发育时期、不同组织以及4种化学药剂(95.1％吡虫啉原药、97.8％噻虫啉原药、95％阿维菌素原药和40％氧乐果乳油)处理无翅蚜中的相对表达量.利用GeNorm,NormFinder,△Ct法,BestKeeper和RefFinder对10个候选内参基因的表达稳定性进行评价.[结果]qRT-PCR结果表明,在麦长管蚜有翅蚜不同发育阶段、无翅蚜不同发育阶段、有翅蚜和无翅蚜不同组织中和4种药剂处理的无翅蚜中表达量较高的内参基因分别是miR-276,miR-276,miR-10-3p和miR-10-3p;5种方法综合分析得出,在上述4种条件下表达稳定性都较好的内参基因分别是miR-252a,miR-993,miR-275和miR-993.GeNorm软件分析表明不同条件下麦长管蚜内参基因的较佳数目为2,结合RefFinder稳定性综合排序的结果分析可知在有翅蚜不同发育阶段、无翅蚜不同发育阶段、有翅蚜和无翅蚜不同组织中和不同药剂处理无翅蚜中稳定表达的内参基因组合分别是miR-252a和miR-276,miR-993和miR-276,miR-275和miR-10-3p,miR-993和miR-10-3p.[结论]麦长管蚜有翅蚜不同发育阶段、无翅蚜不同发育阶段、有翅蚜和无翅蚜不同组织中和不同药剂处理无翅蚜中内参基因优化组合分别为miR-252a和miR-276,miR-993和miR-276,miR-275和miR-10-3p,miR-993和miR-10-3p.研究结果为麦长管蚜miRNA基因定量表达的研究提供了内参基因选择的依据.