牛METTL3真核表达载体的构建及生物信息学分析

• 作者: 黄雯静 赵尚琪 吴陈华 高丽 付金蕾 刘思雨 赵童 陈楠楠 岳山 张泽财 刘宇 周玉龙 朱战波
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 农学
• 关键词: 牛METTL3基因 真核表达载体 生物信息学 分析和预测
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 论著|Research Paper
• 页码范围: 527-533
• 页数: 7页
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2021.06.0081

摘要

[目的]对牛甲基转移酶METTL3基因进行真核表达并对其蛋白进行生物信息学分析.[方法]以MDBK细胞为模板,RT-PCR扩增牛METTL3基因片段,构建pcDNA3.0-METTL3载体并转染至293T细胞后,进行Western Blotting验证,通过生物信息学在线工具分析METTL3蛋白.[结果]PCR、双酶切鉴定、Western Blotting和生物信息学分析表明牛METTL3基因编码区序列全长为1760 bp,编码了580个氨基酸,蛋白的分子质量64.4469 kDa,PI为5.98,属于不稳定亲水性蛋白,不存在跨膜结构与信号肽.二级结构主要是由α螺旋和无规则卷曲构成,三级结构与二级结构预测结果一致.[结论]成功构建了pcDNA3.0-HA-METTL3真核表达载体,生物信息学分析表明,牛METTL3蛋白为在细胞质中分泌合成的可溶蛋白,α螺旋和无规则卷曲为二级结构中最主要的结构元件.