暴马桑黄羊毛甾醇14α-脱甲基酶基因的克隆、序列分析及原核表达

• 作者: 刘增才 王世新 孙婷婷 曲晓磊 邹莉
• 来源期刊: 吉林农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 暴马桑黄 羊毛甾醇14α-脱甲基酶 基因克隆 生物信息学分析 原核表达
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Research Paper
• 页码范围: 530-536
• 页数: 7页
• 分类号: S567.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13327/j.jjlau.2021.5485

摘要

为深入了解暴马桑黄三萜合成途径的调控机理,基于前期测得的转录组数据,同时结合基因组数据(GenBank登录号为LNZH00000000.2),筛选得到暴马桑黄羊毛甾醇14α-脱甲基酶(lanosterol 14-alpha-dem-ethylase,LSD)基因序列,并设计特异引物.以暴马桑黄菌丝体总RNA反转录得到的cDNA为模板,采用PCR技术克隆得到LSD基因cDNA序列全长,命名为SbLSD1(登录号为MN640689).序列分析结果表明,SbLSD1基因cDNA序列全长1 746 bp,编码581个氨基酸,分子量为65.96 ku,没有信号肽,在53～75位氨基酸序列之间含有一个跨膜螺旋结构,属于P450超家族成员.系统发育分析表明,暴马桑黄LSD1蛋白和灵芝LSD蛋白同源性最高.将SbLSD1基因cDNA序列构建到原核表达载体pET-32a上,获得重组质粒pET-32a-SbLSD1,然后将其转入Escherichiia coli BL21中进行SbLSD1蛋白诱导表达.SDS-PAGE结果显示,SbLSD1基因成功表达出蛋白,并在63～75 ku出现与预期大小一致的蛋白条带.通过对SbLSD1基因的克隆及表达分析,为进一步研究该基因在暴马桑黄三萜生物合成过程中的功能奠定基础.