湖北道地药材贝母ISSR反应体系优化及多态性引物筛选

• 作者: 蒋小刚 王华 郭坤元 张美德
• 来源期刊: 福建农业学报
• 关键词: 湖北贝母 ISSR 分子标记 体系优化
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 园艺科学|Horticultural Science
• 页码范围: 642-650
• 页数: 9页
• 分类号: S682
• 语种: 中文
• DOI: 10.19303/j.issn.1008-0384.2021.06.004

摘要

[目的]优化湖北贝母ISSR-PCR体系,并筛选适用于湖北贝母的多态性引物,为后续湖北贝母的分子辅助育种及遗传多样性和亲缘关系分析等提供科学依据.[方法]采用U12(43)均匀设计和单因素试验结合的方法,获得PCR体系各组分(2×Taq Master Mix,模板DNA,引物)的最佳用量,在此基础上通过梯度退火温度实验探究引物的最佳退火温度.[结果]湖北贝母ISSR-PCR最佳反应体系为:20μL反应体系中,2×Taq Master Mix 10.5μL,模板DNA 0.8μL(40.0 ng),引物2.2μL(5.5μmol),ddH2O 6.5μL,ISSR-PCR扩增程序为:94℃预变性5 min;94℃变性0.75 min,54.3℃～60.0℃退火0.75 min,72℃延伸1.5 min,40个循环;72℃延伸10 min,4℃保存.利用优化的反应体系筛选了6条多态性较好、扩增稳定的引物(UBC848、UBC850、UBC853、UBC857、UBC859、UBC866),其最佳退火温度分别为59.3、58.2、56.9、54.3、59.3和60.0℃.用优化的ISSR-PCR体系对12份不同产地的湖北贝母资源进行PCR扩增,结果表明,该反应体系稳定可靠,不同产地湖北贝母具有较丰富的遗传多样性.[结论]优化的湖北贝母ISSR-PCR反应体系可用于湖北贝母种质资源鉴定、亲缘关系和遗传多样性分析等研究.