猪流行性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 南沛 刘高鹏 戴小燕 姜永厚
• 来源期刊: 浙江理工大学学报（自然科学版）
• 关键词: 猪病毒 腹泻 实时荧光定量PCR 熔解曲线分析 检测
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 生物与生命科学|Biology and Life Sciences
• 页码范围: 711-716
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65.11
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-3851(n).2021.05.018

摘要

为开发一种快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的实时荧光定量PCR方法,根据引物设计原则在病毒基因组序列保守区设计了一对PEDV特异性引物,通过系统优化建立了EvaGreen实时荧光定量PCR方法,对其特异性、灵敏度和重复性进行了分析,并将该方法应用于90份临床样品检测.结果表明:该实时荧光定量PCR可以特异性地检测PEDV,对其他非靶标病毒无交叉反应,最低检测限为5 copies/μL;使用3个不同浓度的标准品进行批内和批间重复,Ct值的变异系数在2.8％以下,表明该方法重复性好;临床样品中PEDV的阳性率为48.9％.建立的实时荧光定量PCR是一种快速、准确、高度灵敏且特异的检测方法,可用于PEDV流行病学调查和临床诊断.