马铃薯块茎和土壤样品中粉痂病菌快速检测方法的建立

• 作者: 李磊 赵昱榕 黄艺烁 吴凤芝 李庆全 石延霞 谢学文 柴阿丽 李宝聚
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马铃薯 粉痂菌 快速检测 应用
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 987-995
• 页数: 9页
• 分类号: S432.44
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000725

摘要

马铃薯粉痂菌(Spongospora subterranea f.sp.subterranea)是引起马铃薯粉痂病的病原.本研究根据粉痂菌内部转录间隔区和线粒体DNA的保守区域,分别设计了 2对适用于普通PCR的引物A5/A9、C3/C8和1对适用于荧光定量PCR的引物QF/QR,用于检测块茎和土壤样品中的粉痂菌.特异性检测结果表明:引物对A5/A9和C3/C8,以马铃薯粉痂菌DNA为模板,能分别扩增出264和367 bp大小的单一条带,而对其他非靶标DNA无扩增;引物对QF/QR对马铃薯粉痂菌有单一的熔解峰,说明三对引物特异性良好.灵敏性检测结果表明:荧光定量PCR灵敏度为13.8 fg·μL-1,是普通PCR灵敏度的1 000倍.进一步建立循环域值(Ct)与质粒DNA含量的曲线关系,获得标准曲线y=-3.893 9 x+35.228,R2=0.9966,呈良好线性关系.通过对不同地区采集的18份带菌种薯和18份带菌土壤进行普通PCR和荧光定量PCR检测,引物A5/A9、C3/C8和QF/QR对带菌种薯检测率均为100％,对带菌土壤的检测率分别为44.44％、66.67％和100％.本研究建立的马铃薯粉痂病菌快速检测方法,能及时、准确地检测带菌种薯和土壤,为马铃薯粉痂病的早期诊断和防治提供依据.