集胞藻PCC6803中N-乙酰鸟氨酸转氨酶的生化表征及结构分析

• 作者: 白福美 李至敏 王小琴 胡紫微 鲍玲玲 李志敏
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: N-乙酰鸟氨酸转氨酶 原核表达 生化表征 结构分析 集胞藻PCC6803
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 98-107
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-1149

摘要

旨在对集胞藻PCC6803中slr1022基因编码的N-乙酰鸟氨酸转氨酶进行生化表征及结构分析,为进一步研究该酶的催化功能及机制奠定理论基础.以集胞藻PCC6803基因组为模板,通过PCR扩增获得slr1022基因,将其连接到表达载体pET-28a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态.经IPTG诱导,Ni-NTA亲和层析纯化后获得重组Slr1022蛋白,然后通过紫外分光光度法对Slr1022蛋白的催化功能进行表征,并运用生物信息学软件对该蛋白进行结构分析.成功构建pET28a-slr1022重组表达质粒,并诱导表达重组Slr1022蛋白,SDS-PAGE电泳鉴定该蛋白分子量约为50 kD,与理论大小相符.Slr1022蛋白与底物N-乙酰鸟氨酸的结合常数Km和最大反应速度Vmax分别是0.12 mmol/L和0.60μmol/(L·s),并且Slr1022蛋白与另一底物α-酮戊二酸的Km和Vmax分别是0.039 mmol/L和0.65μmol/(L·s).Slr1022蛋白在pH 8.5时催化活性最强.Slr1022蛋白和其他来源的N-乙酰鸟氨酸转氨酶氨基酸序列有一定的同源性,而且活性位点的氨基酸残基高度保守.成功克隆并表达纯化出Slr1022蛋白,酶学性质和生物信息学研究表明Slr1022蛋白为N-乙酰鸟氨酸转氨酶.