NaV1.5钠通道C末端IQ基序的重组质粒构建及蛋白制备

• 作者: 张峰慧 薛迎春 许兴荣 邵冬雪 张晨阳 刘岩 苏敬阳 胡慧媛 郝丽英
• 来源期刊: 中国医科大学学报
• 关键词: NaV1.5钠通道 IQ基序 重组质粒 pull down实验
• 年，卷（期）: 2021,（8）
• 所属期刊栏目: 论著|Original article
• 页码范围: 694-698
• 页数: 5页
• 分类号: R966
• 语种: 中文
• DOI: 10.12007/j.issn.0258-4646.2021.08.005

摘要

目的 构建NaV1.5钠通道C末端IQ基序原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和生物学鉴定.方法 将IQ基序的cDNA片段插入pGEX-6P-3质粒载体后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达,Glutathione-Se-pharos 4B分离纯化后采用SDS-PAGE检测目的蛋白纯度和相对分子质量,pull-down方法检测GST-IQ融合蛋白的生物学活性.结果 构建的IQ重组质粒经限制性内切酶和基因测序双重鉴定显示质粒构建成功,融合蛋白经纯化后其浓度和纯度均较高,并具有能够与CSL蛋白浓度依赖性结合的生物学活性.结论 本研究成功构建了可以表达生物活性蛋白的NaV1.5钠通道IQ基序原核表达载体,为深入探讨NaV1.5钠通道的生物学功能奠定了重要的物质基础.