基于P18蛋白基因的新型鸭呼肠孤病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 沈丽雅 潘群兴 卢凤英 董永毅 张敬峰 吴坤 刘青涛 姜平 张小飞
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 新型鸭呼肠孤病毒 P18蛋白基因 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖|ANIMAL HUSBANDRY AND VETERINARY SCIENCES·AQUICULTURE
• 页码范围: 1481-1487
• 页数: 7页
• 分类号: S858.325.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2021.06.016

摘要

根据新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)特有的非结构蛋白P18基因保守序列设计1对特异性引物,建立了NDRV荧光定量RT-PCR检测方法.用该方法和普通RT-PCR方法对239份临床样品进行检测,NDRV阳性检出率分别为23.85％(57/239)和17.57％(42/239),荧光定量RT-PCR检测方法的检出率明显高于普通RT-PCR检测方法.随机取5份荧光定量RT-PCR检测方法检测的阳性的样品用鸭胚进行病毒分离培养,经普通RT-PCR扩增和基因测序证明均为NDRV.用103.0ELD50剂量的NDRV-SY株人工感染14日龄雏鸭,不同时间采集泄殖腔肛拭子样品,通过荧光定量RT-PCR检测方法进行排毒情况监测,结果显示,雏鸭人工感染NDRV 48 h时可以从泄殖腔检测到病毒排出,持续时间可达20 d,并发现在病毒感染后的第5 d和第10 d出现2次排毒高峰.试验结果表明,建立的NDRV荧光定量RT-PCR检测方法具有良好的特异性和较高的敏感性,可用于NDRV感染的排毒监测以及临床感染的早期诊断和流行病学调查.