赤羽病病毒核衣壳蛋白原核表达及单克隆抗体制备

• 作者: 魏方 陈冬杰 林祥梅 吴绍强
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 赤羽病病毒 N蛋白 原核表达 单克隆抗体 鉴定
• 年，卷（期）: 2021,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1398-1403
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0185

摘要

为制备赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)核衣壳(N)蛋白单克隆抗体,本研究构建了pET-28a-AKAV-N重组质粒,并将其转化至BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达和镍柱纯化获得重组N蛋白.用重组N蛋白4次免疫小鼠后,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞,利用亚克隆技术和ELISA方法筛选出4株阳性细胞株,分别命名为2D3、5F10、1F4和5D4,并对其进行特异性分析.免疫印迹(Western-blot)结果显示,2D3仅识别AKAV-N蛋白,5F10、1F4和5D4均能够同时识别AKAV-N和施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)N蛋白;间接免疫荧光(IFA)结果显示,2D3、1F4和5D4与AKAV感染的BHK21细胞呈阳性反应,而5F10为阴性.亚型检测结果显示,2D3抗体为IgG2a/κ型,5F10、5D4抗体为IgG1/κ型,1F4抗体为IgG1/λ型.综上所述,本研究获得的单克隆抗体能够为AKAV-N蛋白的相关研究提供支持.