抗PD-1纳米抗体(VHH-C3)在大肠杆菌不同部位表达水平的分析及最适表达温度研究

• 作者: 练玄蝶叶 刘娅菲 熊婧璠 李江伟
• 来源期刊: 保健文汇
• 关键词: 可溶性表达 表达部位 温度
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 药理研究
• 页码范围: 177-180
• 页数: 4页
• 语种: 中文

摘要

目的:分析不同温度下大肠杆菌各部位表达的抗PD-1纳米抗体蛋白,确定可溶性蛋白表达的最适温度及部位,为进一步开展PD-1/PD-L1通路机制研究以及PD1作为肿瘤抑制靶点相关抑制剂的开发和应用提供实验基础.方法:通过超声破碎法和高低渗反复冻融法分别得到胞质、胞间质和包涵体抗PD-1纳米抗体蛋白.经SDS-PAGE分析蛋白表达水平并定量计算蛋白得率得到最适表达可溶性蛋白部位.梯度选择16℃、28℃和37℃三种表达温度,经SDS-PAGE分析和定量后用ELISA检测抗原结合活性.结果:SDS-PAGE定量发现胞质可溶性蛋白的表达量最多,ELISA鉴定胞质蛋白的结合活性最高.16℃可溶性蛋白定量计算表达量最多,与PD-1蛋白结合活性最好.结论:16℃下进行胞质表达能够得到最多结合活性强的可溶性抗PD-1纳米抗体蛋白,为后期的蛋白功能研究和PD1抑制剂筛选评价提供了基础.