人源Tim-1基因过表达载体的构建与鉴定

• 作者: 胡建斌 余文戈
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 关键词: Tim-1基因 LVX-IRES-ZsGreen1质粒 载体构建
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 临床检验|Clinical Laboratory Test
• 页码范围: 1487-1489
• 页数: 3页
• 分类号: R446
• 语种: 中文

摘要

目的 构建可在真核细胞中高效表达人Tim-1的真核表达质粒,并在人胚胎肾细胞293(HEK293)细胞株中鉴定其过表达效率,以便后续用于Tim-1免疫治疗的研究.方法 获取健康人外周血,设计并合成人Tiin-1基因引物,用Taq聚合酶扩增Tim-1基因,用EcoRI和BamHI限制性内切酶切下人Tim-1基因,连接到EcoRI和BamHI酶切的pLVX-IRES-ZsGreen1载体中,构建Tim-1-pLVX-IRES-ZsGreen1真核质粒.脂质体方法转染至HEK293细胞,q-PCR、免疫印迹法以及流式细胞仪法检测人Tim-1过表达效率.结果 Tim-1-pLVX-IRES-ZsGreen1质粒通过脂质体转染至HEK293细胞后,q-PCR、免疫印迹及流式细胞仪法显示人Tim-1在HEK293细胞株中mRNA和蛋白以及绿色荧光蛋白都过度表达.结论 成功构建了可在真核细胞中高效表达Tim-1基因的Tim-1-pLVX-IRES-ZsGreen1真核表达质粒,为进一步研究Tim-1的免疫功能治疗奠定了实验基础.