蛇足石杉HsCAO2基因的克隆、生物信息学分析及载体构建

• 作者: 刘爱佳 陈晓英 李翠 闫志刚 冯世鑫 张占江 雷明 缪剑华
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 蛇足石杉 石杉碱甲 铜胺氧化酶 基因克隆 载体构建
• 年，卷（期）: 2021,（23）
• 所属期刊栏目: 药材与资源|Medicinal Materials
• 页码范围: 7309-7316
• 页数: 8页
• 分类号: R286.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2021.23.025

摘要

目的 为筛选高活性的蛇足石杉铜胺氧化酶(copper-containing amine oxidase,CAO),通过生物工程方法实现石杉碱甲(huperzine A,HupA)的合成、为加快新药创制进度提供理论依据.方法 基于蛇足石杉转录组测序得到的CAO序列片段,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,扩增、拼接并验证获得该基因的全长cDNA序列,并将其命名为HsCAO2.结果 通过RACE技术得到HsCAO2的cDNA全长为2696 bp,CDS为2199 bp,编码732个氨基酸.氨基酸序列同源性比对发现,HsCAO2具有保守的氨基酸位点和Cu2+结合位点;进化树分析结果表明,HsCAO2与蛇足石杉中的另一个CAO(HsCAO1)同源性最高,达91.67％;蛋白质结构分析结果表明,HsCAO2也可能在生物体里以同源二聚体的形式存在.在此基础上,进一步分别构建了超表达载体pOX-HsCAO2和体外蛋白表达载体pET-28a(+)-HsCAO2.结论 HsCAO2很可能是蛇足石杉中的一个新的功能性CAO,且超表达载体和体外蛋白表达载体的成功构建为进一步研究其功能奠定了基础.