单核细胞增生李斯特菌SigB蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

• 作者: 夏叶 孙莹慧 李春华 缪德年
• 来源期刊: 上海农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 单核细胞增生李斯特菌 SigB蛋白 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 国家自然科学基金项目聚焦
• 页码范围: 1-5
• 页数: 5页
• 分类号: S852.61
• 语种: 中文
• DOI: 10.15955/j.issn1000-3924.2022.01.01

摘要

为制备单核细胞增生李斯特菌SigB蛋白及其多克隆抗体,采用PCR方法扩增参考菌株10403S的sigB基因片段,并克隆至原核表达载体pET-30a构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌Rosseta(DE3)感受态细胞进行原核表达,利用Ni-NTA亲和层析纯化SigB蛋白,通过免疫兔体获得多克隆抗体.结果表明:成功构建SigB重组质粒,并诱导表达出可溶性SigB蛋白,其相对分子质量约30 ku,纯化后的SigB蛋白质量浓度约为1.5 mg∕mL,获得的多克隆抗体效价为1:51200.经Western-blot验证,该多克隆抗体能特异性检测SigB蛋白,表现出良好的抗体特异性.本研究可为探究单增李斯特菌的应激调控机制奠定基础.