茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化

• 作者: 骆洋 王弘雪 王云生 卢忠尉 刘亚军 单育 陈啸天 叶辉 高丽萍 夏涛
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 花青素还原酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 页码范围: 326-332
• 页数: 6页
• 分类号: S571.1,Q554
• 语种: 中文

摘要

茶树花青素还原酶是催化非酯型儿茶素EC和EGC合成的关键酶。采用RT-PCR技术，获得了茶树花青素还原酶基因的开放阅读框，它编码含337个氨基酸的蛋白质，推测分子量为37kD，等电点为6.54；成功地将该基因重组到表达载体pET32a(+)上，并在大肠杆菌rosetta中进行原核表达；优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、氨苄青霉素浓度，纯化出目的蛋白。HPLC检测表明，目的蛋白具有ANR酶活性。