鸡Atg5基因过表达载体的构建与功能验证

• 作者: 韩琪 王茜倩 徐钰芳 郁建锋 徐璐 顾志良
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 自噬相关基因5(Atg5) 自噬 脂质代谢 鸡
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告|Articles and Letters
• 页码范围: 716-725
• 页数: 10页
• 分类号: S831.2
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2022.04.010

摘要

鸡肉占肉质消费品首位,过多的脂质沉积会降低肉质.研究表明自噬参与肝脏脂质代谢,改善脂质沉积,从而调控禽类脂质代谢.本研究旨在探究自噬相关基因5(autophagy related gene 5,Atg5)对鸡(Gallus gallus)成纤维细胞系DF-1细胞内的脂质代谢相关基因的影响.根据NCBI数据库中鸡ATG5蛋白(NP_001006409.1)氨基酸序列,利用ExPASy数据库对鸡ATG5蛋白进行理化特性分析;利用qPCR技术检测鸡各组织中Atg5基因的表达情况;构建过表达重组质粒pcDNA3.1-Atg5,并且利用RNAi技术干扰Atg5表达;最后,检测干扰和过表达Atg5后相关脂代谢基因:载脂蛋白B(apolipoprotein,ApoB)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FASN)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,ACACA)、过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxisome proliferator-activated receptor-α,PPARα)、叉头转录因子-1(forkhead box protein-1,Foxo1)、脂肪酸结合蛋白7(fatty acid-binding protein 7,FABP7)、分拣蛋白1(sortilin 1,Sort1)的表达情况;结果表明:鸡ATG5蛋白是相对分子质量为32.478 kD的不稳定蛋白质,Atg5在各组织中均有表达,其中以胸肌组织中表达量最高;此外,成功构建过表达载体pcDNA3.1-Atg5,筛选出最优干扰siRNA—siRNA-330,过表达或干扰Atg5基因对其他脂代谢相关基因的表达情况均有影响;其中,过表达Atg5后,ApoB的表达量显著降低,Sort1的表达量显著增加,FABP7变化不显著;干扰Atg5后,FABP7和ApoB的表达量显著提高,Sort1变化不显著,推测三者与Atg5可能存在潜在联系.本研究为进一步研究鸡Atg5基因的功能提供参考依据.