两种培养条件下重组杆状病毒表达小反刍兽疫病毒N蛋白的丰度

• 作者: 师亚玲 韩佃刚 董俊 叶玲玲 李凌枫 陈朝林 信吉阁 艾军
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒N蛋白 Sf9昆虫细胞 贴壁培养 悬浮培养 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 97-102
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2022.02.019

摘要

为了在重组杆状病毒上获得高丰度表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白,利用细胞贴壁培养和悬浮培养法培养重组杆状病毒Vbacmin-PPRV-N 120 h,用显微镜观察不同时间点细胞形态变化,随后在培养24、48、72、96、120 h时分别收集培养液,以ELISA方法检测PPRV N蛋白表达量,并用SPSS软件对数据进行统计分析.显微镜下观察发现,在感染重组杆状病毒后,两种方式培养的细胞随着时间增加,均由形态大小均匀、圆形、透亮、折光性好,变为大小不均匀、折光性差,并且出现了很多细胞碎片.根据ELISA检测结果,摇瓶悬浮培养条件下PPRV N蛋白的表达量显著高于贴壁培养,摇瓶悬浮培养的昆虫细胞蛋白表达量在96 h达到最高峰,120 h蛋白表达量开始下降,贴壁培养的昆虫细胞蛋白表达量在120 h达到最高峰.研究表明,用昆虫杆状病毒系统大规模表达PPRV N蛋白时更适合用摇瓶悬浮培养方法.本研究为优化昆虫细胞表达PRRV N蛋白的培养条件提供了参考.