双背景法扣除溶剂水峰及蛋白质热变性的研究

• 作者: 徐杨彪 王海水
• 来源期刊: 光谱学与光谱分析
• 学科: 化学
• 关键词: 牛血清蛋白水溶液 溶剂水峰 杂化光谱法 双背景
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 页码范围: 642-646
• 页数: 5页
• 分类号: O657.33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3964/j.issn.1000-0593(2022)02-0642-05

摘要

研究蛋白质水溶液的红外光谱(IR)谱时,由于溶剂水的强吸收与蛋白质的吸收峰会发生严重重叠,极大地干扰对蛋白质吸收峰的识别、定性、定量和结构分析.尝试利用杂化光谱法扣除溶剂水峰.采用双背景方法,用空白ATR晶体(背景样品1)与ATR水层(背景样品2)合成了单光束杂化背景谱,通过控制对背景样品1和背景样品2的扫描次数,合成的单光束杂化背景谱中水的信号强度可任意调节,成功实现了牛血清白蛋白(BS A)水溶液中溶剂峰的在线扣除.与光谱差减技术比较,杂化光谱扣除法具有显著的优势:水3400 cm-1峰强度接近于零,1700～1800 cm-1区间得到近似平滑直线,水1640 cm-1峰彻底扣除,观察到了高质量的酰胺I带吸收峰.将杂化谱法获得BS A红外光谱二次微分,得到蛋白质二级结构大量信息,与文献报道高度吻合.杂化光谱法应用到蛋白质热变性研究中,成功获得没有溶剂水峰干扰的蛋白质红外光谱,变性前后,酰胺Ⅰ带光谱发生明显改变,峰形变化显著,吸收峰往低波数方向移动,吸收强度显著减小.杂化光谱ATR法扣除溶剂水峰简单、易操作、效果令人满意.