一种导向性溶栓剂的基因构建及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 杨嘉树 茹炳根 蒋朋宸
• 来源期刊: 北京大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人活化血小板表面糖蛋白GMP140 单克隆抗体 尿激酶 单链抗体 DNA重组 纤溶活性
• 年，卷（期）: 1999,（4）
• 页码范围: 487-495
• 页数: 9页
• 分类号: Q71
• 字数: 4916字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0479-8023.1999.04.010

摘要

以针对人活化血小板表面糖蛋白GMP140的单克隆抗体SZ51的单链抗体作为导向分子,以单链尿激酶32 kd变体(Scu-PA-32k)作为效应分子,构建了一种新型的导向性溶栓剂.通过聚合酶链式反应(PCR),分别从SZ51的Fab片段基因中扩增出VK和VH区;从尿激酶原基因中扩增出Scu-PA-32 k基因.通过合适的linker及酶切位点,将VK,VH及scu-PA-32k基因相连接并装入表达载体pET-5a中的Nde I位点,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达了重组蛋白.western-Blotting检测到在8 mol/L尿素存在下,该重组蛋白与抗尿激酶的多克隆抗体之间仍有弱的结合反应.表达产物经变复性处理和部分分离纯化后,在纤维蛋白平板上表现有较好的纤溶活性,且这种活性是通过激活纤维蛋白溶酶原为纤溶酶而实现的.重组蛋白纤溶活性的比活达到17 500IU/mg,较好地保留了尿激酶的纤溶活性,重组蛋白的产率约每100 g湿菌为1.5 mg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	茹炳根	北京大学蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室	102	1233	20.0	29.0
2	杨嘉树	北京大学蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室	1	13	1.0	1.0
3	蒋朋宸	北京大学蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室	1	13	1.0	1.0