HCV5'NCR片段调控荧光素酶表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的表达

• 作者: 朱宝珍 李梦东 王升启 王小红
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎病毒,丙型 荧光素酶 pHCV-luc09 HepG2肝癌细胞
• 年，卷（期）: 1999,（1）
• 所属期刊栏目: 病毒学
• 页码范围: 17-20
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.1999.01.005

摘要

目的 构建HCV 5'NCR片段调控荧光素酶表达质粒,并在HepG2细胞中表达.方法 通过PCR扩增,获得中国人HCV基因组5'非编码区(noncoding region, NCR)完整序列与C区部分序列的目的基因片段(5'NCR-C片段).将此片段插入pGL3荧光素酶报告载体的荧光素酶基因起始密码上游,构建受5'NCR 片段调控的荧光素酶表达质粒.应用脂质体介导基因转染技术将8个质粒转染HepG2肝癌细胞.结果 经鉴定获得8个均为正向插入的阳性克隆.序列分析结果表明插入片段与中国人HCV(Ⅱ型)序列基本一致,其荧光素酶基因起始密码子已去除且未改变编码框.有一个质粒能够表达荧光素酶活性,其绝对值达1141.9±151.1 mV,是pGL3报告载体荧光素酶活性的20%.结论 当质粒1μg、Lipofectin 6μl,Lipofectin-质粒复合物与细胞孵育4小时时可获得最佳转染效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王升启	军事医学科学院放射医学研究所	315	3297	28.0	41.0
2	朱宝珍	军事医学科学院放射医学研究所	12	38	4.0	5.0