乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究

• 作者: 丁天兵 姜绍谆 张富泉 樊英茹 肖毅 马文煜 黄庆生
• 来源期刊: 中国病毒学
• 学科: 生物学
• 关键词: 日本脑炎病毒 感染性RNA 体外转录 全长cDNA
• 年，卷（期）: 2000,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 330-335
• 页数: 6页
• 分类号: Q785
• 字数: 3182字
• 语种: 英文

摘要

本研究根据已知的乙脑病毒(JEV)SA14株基因序列设计一套引物 ,利用长模板RT-PCR 技术,一次扩增出了JEV的全长cDNA,并采用大片段克隆技术将其克隆于载体的RNA聚合酶启动子下游.阳性克隆转录的RNA转染HBK细胞后细胞产生病变,经乳鼠脑内接种及特异性免疫荧光染色证明为JEV,这一结果表明JEV感染性克隆的构建获得了成功.其次,合成一条含有 RNA聚合酶启动子序列的5′引物,利用长模板RT-PCR方法扩增出带有启动子的JEV全长cDNA ,以此cDNA为模板作体外转录.转录产物转染BHK细胞后观察到了典型的JEV病变.收获的病毒经乳鼠脑内接种及免疫荧光染色证明为JEV,从而建立了制备JEV感染性RNA的快捷方法.本研究构建的JEV感染性克隆与建立的长模板RT-PCR快速制备JEV感染性RNA的方法,将为JEV 分子生物学研究的后续工作提供有力的工具和奠定坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄庆生	第四军医大学微生物学教研室	8	53	4.0	7.0
2	丁天兵	第四军医大学微生物学教研室	32	161	7.0	11.0
3	马文煜	第四军医大学微生物学教研室	43	434	9.0	19.0
4	姜绍谆	第四军医大学微生物学教研室	5	46	3.0	5.0
5	肖毅	第四军医大学微生物学教研室	13	87	6.0	9.0
6	张富泉	第四军医大学微生物学教研室	2	31	1.0	2.0
7	樊英茹	第四军医大学微生物学教研室	1	31	1.0	1.0