用于DNA转染的PRRSV全长感染性cDNA克隆改建及应用

• 作者: 刘长龙 李燕华 袁世山
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 全长感染性cDNA克隆 HDV核酶 DNA转染
• 年，卷（期）: 2010,（23）
• 页码范围: 12891-12894,12897
• 分类号: S858.28
• 字数: 3781字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.23.214

摘要

[目的] 利用核酶自我剪切功能使PRRSV的基因组获得1个精确的基因组3′ 末端,提高全长感染性cDNA克隆的病毒拯救效率.[方法]用3步PCR方法将获得含有丁型肝炎病毒核酶序列的片段并将其克隆到PRRSV全长cDNA克隆pAPRRS的poly(A)下游,再通过酶切,连接将牛生长激素多聚腺甘酸转录终止序列插入到核酶序列后,构建成全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB,新构建的克隆转染MARC-145细胞,72 h后用间接免疫荧光检测病毒N蛋白和非结构蛋白2(nsp2)的表达,并检测细胞上清中病毒的滴度.[结果]成功构建了含有核酶序列的PRRSV基因组全长感染性cDNA克隆pAPRRS-HB.新构建的全长感染性cDNA克隆能够较好地拯救出病毒,拯救效率比pAPRRS提高10倍左右.[结论] 该结果为研究PRRSV基因结构与功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	袁世山	中国农业科学院上海兽医研究所猪呼吸系统疾病研究室	33	152	8.0	10.0
2	刘长龙	中国农业科学院上海兽医研究所猪呼吸系统疾病研究室	6	43	3.0	6.0
3	李燕华	中国农业科学院上海兽医研究所猪呼吸系统疾病研究室	4	13	2.0	3.0