邻单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfd C)的克隆及其在大肠杆菌中表达

• 作者: 夏怡丰 王文东 罗如新 蒯本科 陈文峻 马忠华
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 邻单胞菌邻苯二酚1 2-双加氧酶基因(tfd C) PCR 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2000,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 579-585
• 页数: 7页
• 分类号: Q786
• 字数: 3405字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2000.06.003

摘要

根据已报道的邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfdC)序列,设计PCR引物,从一株邻单胞菌(Plesiomonas)的pL1质粒上扩增到tfdC基因片段,连接到pGEM-T载体上,并转化大肠杆菌JM109菌株,筛选到阳性克隆.序列分析结果表明,PCR产物全长801bp,有一个阅读框,编码255个氨基酸,与增氧产碱菌(Alcaligeneseutroplus)的tfdC基因相比,在693位相差一个碱基(C→A),导致编码产物在228位相差一个氨基酸.将目的片段克隆到pBluescrip-tIIKS质粒载体上,筛选到阳性克隆pBt12G,在大肠杆菌JM109中可表达邻苯二酚1,2-双加氧酶(C120)的活性;将翻译起始密码子为ATG的目的片段克隆到pET-30a质粒载体上,筛选到阳性克隆pET30A,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中可表达目的蛋白.C120是芳香族化合物降解过程中的关键酶,为了进一步在草坪草中表达tfdC基因,利用草坪草降解环境中芳香族污染物,将该基因翻译起始密码子由GTG突变成ATG,突变后的基因在大肠杆菌中可正常表达C120的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马忠华	复旦大学生命科学学院生物化学系	3	41	2.0	3.0
2	罗如新	复旦大学环境科学与工程系	7	39	4.0	6.0
3	夏怡丰	复旦大学生命科学学院生物化学系	1	17	1.0	1.0
4	王文东	复旦大学生命科学学院生物化学系	2	23	2.0	2.0
5	陈文峻	复旦大学生命科学学院生物化学系	3	23	2.0	3.0
6	蒯本科	复旦大学生命科学学院生物化学系	14	124	6.0	11.0