丙型肝炎病毒核心蛋白可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘妍 夏小兵 成军 施双双 王刚 王琳 钟彦伟 陈菊梅
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 丙型肝炎病毒 核心蛋白 单链可变区抗体 表达
• 年，卷（期）: 2000,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 394-397
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3286字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2000.06.002

摘要

利用分子生物学技术,构建表达丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白的人源单链可变区抗体(ScFv)的原核表达载体,并在大肠杆菌JM109中表达可溶性的HCV-core-ScFv.以重组的HCV核心蛋白为包被抗原,利用噬菌体抗体库的表面展示技术,筛选到含有HCV-core-ScFv基因的噬菌体克隆.从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经NcoI/Not I酶切鉴定,该ScFv基因由750bp组成.将其亚克隆到pCANTAB5E表达载体中,转化大肠杆菌JM109,提取质粒进行DNA序列测定,符合ScFv的重链可变区和轻链可变区基因结构特点.IPTG诱导转化的大肠杆菌JM109,在其培养上清中获得了可溶性HCV-core-ScFv的表达.酶联免疫吸附法(ELISA)证实表达的HCV-core-ScFv具有重组HCV核心蛋白的反应活性和特异性.对转化的JM109大肠杆菌上清中表达的HCV-core-ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),证实表达的HCV-core-ScFv的分子量为28kDa.为应用HCV-core-ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础.