利用翻译偶联实现广谱抗病毒蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达

• 作者: 叶丙雨 师明磊 张彦 张章 李平 沈文龙 谢德健 赵志虎 邢伶越
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 小泛素相关修饰蛋白质类 pTIG-mSUMO 原核表达 可溶性 翻译偶联 非融合
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 597-601
• 页数: 5页
• 分类号: R378.2
• 字数: 4067字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.08.006

摘要

目的：以具有广泛助溶活性的小泛素相关修饰蛋白（ small ubiquitin－related modifier，SUMO）为辅助蛋白，利用翻译偶联，构建一种新型非融合可溶原核表达载体，实现广谱抗病毒蛋白RA在大肠杆菌中的非融合可溶表达。方法以PCR方法从酵母基因组中克隆SUMO蛋白基因smt3并进行定点突变，去除其中的EcoRⅠ酶切位点，获得同义突变体mSUMO。通过翻译偶联Linker序列的设计、合成，构建以mSUMO蛋白为辅助蛋白的翻译偶联表达载体pTIG－mSUMO。 PCR扩增获得带有相应酶切位点的广谱抗病毒蛋白 RA 的基因，将其克隆至 pTIG－mSUMO中，获得表达载体pTIG－mSUMO／RA，实现RA在大肠杆菌中的非融合可溶性表达。结果 IPTG诱导蛋白表达以后，SDS－PAGE和Western印迹检测证实，目的蛋白RA的表达量明显增加，且可溶比例约占50％。结论以优化后的SUMO为辅助蛋白，成功构建了一种非融合的可溶原核表达载体pTIG－mSUMO，实现了RA蛋白在大肠杆菌中的高效非融合可溶表达，既提高了表达水平，也提高了可溶性。 pTIG－mSUMO作为一种可溶的非融合表达载体，在实现外源蛋白的高效可溶表达方面，很可能具有一定的普遍性。