串联杂种泛素结合结构域蛋白（ThUBD）在大肠杆菌中的可溶性高效表达

• 作者: 徐平 李衍常 罗维佳 邓晨 高媛
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: ThUBD 泛素化蛋白 大肠杆菌 密码子优化 融合表达 蛋白质组学
• 年，卷（期）: 2016,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 795-800,818
• 页数: 7页
• 分类号: Q51
• 字数: 6231字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2016.10.005

摘要

目的：提高人工串联杂种泛素结合结构域蛋白（ tandem hybrid UBD， ThUBD）在大肠杆菌中的可溶性表达量，为泛素化蛋白研究提供高效特异的富集方法。方法根据大肠杆菌同义密码子相对频率（ RFSC）表对大肠杆菌的密码子进行分类，计算ThUBD密码子的相对适应度，并根据分析结果对ThUBD的密码子进行优化；诱导表达和蛋白定量检测密码子的优化结果；亲和纯化及泛素化蛋白富集研究检测密码子优化后的ThUBD－S的UbC结合能力。结果根据分析结果优化ThUBD密码子，使得适于大肠杆菌基因表达的密码子从48％增加到75％，并消除了阻碍转录翻译的密码子，其密码子适应指数（CAI）从0．63升高到0．88。密码子优化后的ThUBD其可溶性蛋白ThUBD－S的表达量增加了4倍，达到总蛋白的13．06％。同时，优化后的ThUBD－S可能具有更高的UbC的结合能力。结论 ThUBD的基因序列经过优化后，其在大肠杆菌中的表达量升高4倍左右。同时，序列优化不影响融合蛋白ThUBD在大肠杆菌中的可溶性表达和结合UbC的能力。