人CD40-Ig融合蛋白在CHO细胞中的表达与纯化研究

• 作者: 侯春梅 刘荷中 吴英 唐佩弦 李秀森 毛宁 沈倍奋 郭子宽
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 融合蛋白 CD40-Ig CHO细胞
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 所属期刊栏目: 免疫治疗
• 页码范围: 151-155
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4334字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2001.02.010

摘要

目的建立稳定表达CD40-Ig融合蛋白的工程细胞株，获得大量融合蛋白以研究靶向阻断CD40∶CD40L途径防治移植物抗宿主病（GVHD）策略的应用潜力。方法自真核瞬时表达载体pIG/40Ig中切下CD40-Fc融合基因，插入pcDNA3.1载体中构建稳定表达载体。利用脂质体Lipofectamine将该载体转染CHO细胞，G418筛选抗性克隆；夹心ELISA法检测上清中CD40-Ig融合蛋白的表达；Western blot法鉴定其免疫学活性。利用有限稀释法对筛选出的混合克隆单克隆化。滚瓶法无血清大批培养工程细胞，Protein A亲和层析法纯化，SDS-PAGE后薄层扫描分析纯度。利用流式细胞术检测该蛋白与Jurkat细胞表面CD40L的结合功能。结果 CD40-Fc融合基因插入pcDNA3.1载体后构建成功稳定表达载体p3.1/40Ig，转染CHO细胞后经2次克隆化获得稳定表达CD40-Ig融合蛋白的基因工程细胞株，命名为B2。Protein A亲和层析纯化后融合蛋白纯度达95 %以上，该融合蛋白可特异结合Jurkat细胞表面的CD40L。结论 CD40-Ig融合蛋白可模仿天然分子与其配基结合，为研究靶向CD40∶CD40L途径的治疗制剂在防治GVHD中的潜在应用提供了有用的工具。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈倍奋	军事医学科学院基础医学研究所	213	1497	18.0	31.0
2	侯春梅	军事医学科学院基础医学研究所	39	357	7.0	18.0
3	郭子宽	军事医学科学院基础医学研究所	62	403	9.0	17.0
4	唐佩弦	军事医学科学院基础医学研究所	24	313	10.0	17.0
5	毛宁	军事医学科学院基础医学研究所	72	529	12.0	20.0
6	李秀森	军事医学科学院基础医学研究所	25	195	7.0	13.0
7	吴英	军事医学科学院基础医学研究所	22	74	5.0	7.0
8	刘荷中	军事医学科学院基础医学研究所	20	81	5.0	7.0