VEGF165 cDNA在酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究

• 作者: 姚立红 姜忠良 张智清 王小宁 陈爱君 马骊
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 血管内皮生长因子 毕赤巴斯德酵母 表达
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3872字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2001.01.007

摘要

目的研究人 VEGF165基因在 Pichia pastoris酵母中的表达，获得高效表达、具有生物学活性的重组 hVEGF165。方法采用 PCR扩增 hVEGF165基因，经 DNA序列分析后，插入含 AOX1 启动子和α分泌信号肽序列的 Pichia pastoris酵母表达载体中，构建重组质粒 pPIC9K/hVEGF165。经转化酵母宿主菌 KM71，筛选多拷贝整合转化子，摇瓶培养，用 10 mL/L甲醇诱导表达。表达产物经 Heparin-Sepharose CL6B亲和层析纯化后，以人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)测定其生物学活性。结果 SDS-PAGE分析显示，表达产物以可溶性分子的形式存在于上清中，诱导 4 d的表达量达上清中总蛋白的 60％以上。 Western blot表明，表达产物具有良好的抗原性和特异性。经 Heparin-Sepharose CL6B亲和层析纯化， rhVEGF165的纯度可达到 90％以上。生物学活性检测证实，其具有刺激脐静脉内皮细胞 (HUVEC)增殖的活性。结论在 Pichia pastoris表达系统中，实现了 hVEGF165的高效分泌性表达。