鼻咽上皮组织定向cDNA文库的快速构建

• 作者: 余鹰 向娟娟 周鸣 张小慧 张必成 朱诗国 李忠花 李桂源 邱元正 钱骏
• 来源期刊: 中华耳鼻咽喉科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽 DNA,重组 基因文库 遗传学技术
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 47-50
• 页数: 4页
• 分类号: R76
• 字数: 3173字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1673-0860.2001.01.016

摘要

目的采用SMART (switching mechanism at 5′ end of RNA transcript)技术，快速构建了高质量的成人鼻咽上皮组织定向cDNA文库。方法从成人正常鼻咽上皮组织分离总RNA，利用经修饰的oligo（dT）引物（含sfi IB酶切位点）合成cDNA第一链，同时根据真核生物mRNA 5′端帽子结构特点，利用SMART核苷酸（含sfi IA酶切位点）作为cDNA第二链在mRNA 5′端延伸出去的模板，进而以此序列为引物利用LD-PCR（Long-distance-PCR）合成双链cDNA，双链cDNA经sfi I(IA & IB)酶切和过柱分级分离后，克隆入经sfi I酶切的λTripIEX2载体后经体外包装而成cDNA文库。结果获得1.5×106个重组子，重组率达100%。文库扩增后，滴度达3.8×109 pfu/ml，插入cDNA平均长度为1.5 kb。结论构建的成人鼻咽cDNA 文库具有良好的质量，该cDNA文库为进一步筛选、克隆鼻咽癌抑瘤基因及鼻咽组织特异性表达基因奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邱元正		42	249	9.0	13.0
2	张必成	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0
3	余鹰	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0
4	钱骏	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0
5	周鸣	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0
6	李忠花	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0
7	张小慧	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0
8	向娟娟	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0
9	朱诗国	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0
10	李桂源	长沙中南大学湘雅医学院肿瘤研究所	1	5	1.0	1.0