鼠抗脂多糖单链噬菌体抗体库的构建

• 作者: 俞丽丽 府伟灵 张雪 陈鸣
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 脂多糖 噬菌体抗体库
• 年，卷（期）: 2001,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 407-409
• 页数: 3页
• 分类号: R373.9|R392.11
• 字数: 2985字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2001.04.012

摘要

目的　构建一个鼠源性的抗脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）单链噬菌体抗体库，以供进一步生物医学应用。方法　用纯LPS免疫BALB/c小鼠4个星期后，从脾细胞中提取总RNA，用RT-PCR技术扩增出小鼠抗体重链、轻链可变区基因（VH，VL），然后用Linker将VH，VL交联形成单链抗体可变区片段（ScFv）。经NotI、SfiI双酶切后与经同样双酶切的pCANTAB5E噬菌粒载体相连，转化入感受态大肠杆菌TG1，构建鼠抗LPS单链噬菌体抗体库，并随机抽取转化后的4个大肠杆菌TG1菌落，以检测外源DNA的转入情况。结果　ELISA法检测小鼠血清中抗LPS的效价为1∶12 800。提取的总RNA浓度为12.3813 μg/ml，纯度较好。扩增出的VH长约340 bp，VL长约320 bp，ScFv长约800 bp。转化入TG1后有约1.9×107个菌落，抽提4个菌落后经SfiⅠ、NotⅠ双酶切的结果显示有1个菌落的质粒转化进了外源DNA片段。结论　成功地构建出了一个有效库容量为4.75×106的鼠抗LPS单链噬菌体抗体库。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	府伟灵	第三军医大学附属西南医院检验科	406	5132	33.0	56.0
2	张雪	第三军医大学附属西南医院检验科	58	837	12.0	27.0
3	陈鸣	第三军医大学附属西南医院检验科	122	956	15.0	25.0
4	俞丽丽	第三军医大学附属西南医院检验科	66	492	12.0	18.0