人神经生长因子基因在大肠杆菌中的表达

• 作者: 何晓嫱 刘戟 林佳 游乐然 王若菡 陈俊杰 陈建业
• 来源期刊: 华西医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人基因组DNA 神经生长因子 大肠杆菌 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 94-97
• 页数: 4页
• 分类号: R739
• 字数: 2824字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2002.01.028

摘要

目的为进一步研究神经生长因子( β-NGF) 及其基因的结构及功能奠定基础.方法自行设计合成一对特异引物,直接从人血细胞基因组DNA中 PCR扩增出NGF基因片段,克隆至pGEM-T Easy载体,pGEM-T-NGF克隆片段再定向插入原核表达载体pGEX-5T,构建的重组体p5TNF转化大肠杆菌JM109并经IPTG诱导表达.结果经限制性酶谱和DNA测序确证,pGEM-T-NGF克隆片段为β-NGF全长编码序列 (380bp);SDS-PAGE、分光光度计扫描和Western印迹显示,p5TNF转化菌有40.5×103 u 特异区带,融合蛋白表达量为503.2mg/L, 占菌体可溶性蛋白总量(7.4g/L)6.8%,该产物具NGF抗原活性.结论本研究成功克隆β-NGF基因全长编码序列并在大肠杆菌中获稳定表达,同时证实国人β-NGF基因编码无特殊性.