人神经生长因子β亚基cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 刘东海 张乐鸣 张更荣 张顺 董虹
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类 神经生长因子 DNA,重组 序列分析 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 486-489
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 2532字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2002.05.011

摘要

目的:从海马组织提取中国人神经生长因子基因(NGF β),分析中国人NGF β序列,再克隆成熟肽部分,使NGF β在大肠杆菌中表达.方法: 提取组织总RNA进行逆转录,克隆到PCRⅡ载体,得650 bp DNA片段,以PCRⅡ/NGF β载体为模板,扩增C端成熟肽部分,并克隆到PG5中,转化大肠杆菌BL21用异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导培养.表达产物提纯、复性后,进行活性测定. 结果:NGF β cDNA全序列为1 047 bp,所克隆的蛋白编码部分为636 bp,由212个氨基酸组成,序列分析结果与Genebank完全一致,成熟肽部分表达后,经SDS-PAGE电泳在14 kD左右有1条明显的新增蛋白带,与预期的分子量相符,并Western印迹证实,rNGF约占菌体蛋白10%左右. 结论: 通过序列分析证实,重组NGF β在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并有免疫活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘东海	宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室	30	133	6.0	10.0
2	张乐鸣	宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室	34	104	6.0	7.0
3	董虹	宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室	6	27	3.0	5.0
4	张顺	宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室	68	331	9.0	14.0
5	张更荣	宁波市第二医院肿瘤分子生物学实验室	10	42	4.0	6.0