人硫氧还蛋白还原酶cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

• 作者: 华超 卢是月 彭光勇 徐江英 戴荣 许琳
• 来源期刊: 南京医科大学学报(自然科学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 硫氧还蛋白还原酶 序列分析 原核表达 人类
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 109-111
• 页数: 3页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2725字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4368.2003.02.006

摘要

目的:克隆人硫氧还蛋白还原酶(TR)基因并构建原核表达载体,获得TR蛋白.方法:采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人胚脑组织中扩增出TR cDNA片段,克隆至pGEM-T载体并转化大肠杆菌DH5α,获得重组质粒pGEM-TR;经序列分析证实后,提取pGEM-TR重组体,由双酶切得到目的片段,并插入pET9c原核表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组质粒pET-rhTR.异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导pET-rhTR在BL21中表达,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)分析重组蛋白.结果:克隆的TR cDNA与人胎盘组织TR cDNA同源性为99%;pET-rhTR在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白占菌体总蛋白量的36%,其分子质量为55 ku.TR cDNA序列被GenBank收录,登录号为AF2080 1 8.结论:成功克隆了人脑组织来源的TR基因,该基因在大肠杆菌中得到高表达,为进一步研究其功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢是月	南京军医学院生物基因工程研究中心	4	45	4.0	4.0
2	彭光勇	南京医科大学微生物与免疫学教研室	24	265	5.0	16.0
3	许琳	南京军医学院生物基因工程研究中心	9	81	4.0	9.0
4	徐江英	南京军医学院生物基因工程研究中心	7	80	4.0	7.0
5	戴荣	南京军医学院生物基因工程研究中心	1	4	1.0	1.0
6	华超	南京军医学院生物基因工程研究中心	2	46	2.0	2.0