人LIGHT基因的克隆及其重组腺病毒载体的构建

• 作者: 吴东 吴孟超 娄永华 沈锋 焦炳华
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒 表达载体 人LIGHT基因 基因克隆
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 121-124
• 页数: 4页
• 分类号: R735.2
• 字数: 3393字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2002.02.007

摘要

目的克隆人LIGHT基因,构建其重组腺病毒载体,以研究LIGHT过表达与腺病毒感染对细胞生长的影响.方法用RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人的LIGHT全长基因.将LIGHTcDNA克隆到穿棱载体pAdTrack-CMV-LIGHT重组质粒中,经酶切线性化后,将重组质粒pAdTrack-CMV-LIGHT和骨架质粒pAdEasy-1,以电穿孔法共转染大肠杆菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒.最后,将线性化的重组腺病毒质粒转染293细胞包装获得重组腺病毒,用荧光显微镜、PCR及Western blot分析LIGHT基因的表达. 结果用RT-PCR法从人的PBMC中,扩增出723bp的cDNA,测序证实为人LIGHT基因.荧光显微镜、PCR及Westernblot证实,LIGHT重组腺病毒可感染293细胞,并在293细胞内进行有效的复制.结论成功地克隆了人LIGHT基因,并构建了其重组腺病毒载体,为进一步研究LIGHT基因的功能提供了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴孟超		17	140	5.0	11.0
2	沈锋		7	96	3.0	7.0
3	焦炳华	第二军医大学基础部分子生物学与生物化学教研室	215	1714	20.0	33.0
4	娄永华	第二军医大学基础部分子生物学与生物化学教研室	36	203	8.0	12.0
5	吴东		4	20	3.0	4.0