表达和纯化人巨噬细胞弹性蛋白酶的催化区以高通量筛选酶抑制剂

• 作者: 叶其壮 沈强 程东航 钱蓁 钱静
• 来源期刊: 中国药理学报（英文版）
• 学科: 医学
• 关键词: 基质金属蛋白酶 人巨噬细胞弹性蛋白酶 基因表达 高通量筛选
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 研究原著
• 页码范围: 143-151
• 页数: 9页
• 分类号: R96
• 语种: 英文

摘要

目的:获得具有催化活性的人巨噬细胞弹性蛋白酶的催化区(hMECD),并建立有效的高通量筛选方法筛选其抑制剂.方法:在大肠杆菌中表达hMECD,并根据酶活性以比色法建立高通量筛选模型.对一批共8560个纯化合物和混合物进行了高通量筛选.结果:构建了有效的大肠杆菌表达系统.存在于包涵体中的表达蛋白在体外重折叠复性,经阴离子交换柱层析的方法纯化,l L大肠杆菌培养物可得到23mg纯化的活性蛋白.该蛋白的重折叠复性和酶活性需要钙锌离子,但高浓度的锌离子则抑制其重折叠复性和活性.hMECD剪切合成底物包括一个硫酯和几个荧光发生的肽类底物,并在pH 8.0显示最强的活性.对8560个化合物和混合物的高通量筛选发现了2了个纯化合物和14个天然产物在20mg/L的浓度下具有大于80%的抑制活性.结论:建立了有效的人巨噬细胞弹性蛋白酶的催化区表达和纯化的方法.该重组蛋白抑制剂的高通量筛选模型具有有效、可信和快速的特点.