扩增bFGF的条件优化及其真核载体构建

• 作者: 丁焕文 张丽君 张宏斌 王捷 郭勇
• 来源期刊: 实用医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 成纤维细胞生长因子,碱性 基因表达 遗传载体 聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2002,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 919-921
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5725.2002.09.005

摘要

目的:优化采用PCR技术从PBR322-bFGF质粒扩增bFGF 基因片段的条件并构bFGF真核表达载体,为研究bFGF基因转移在骨组织工程学中的应用提供研究基础.方法:(1)在不同的模板量、Mg2+浓度、退火温度下经PCR扩增bFGF基因, 琼脂糖凝胶电泳检测.(2)载体和PCR产物经EcoRI和HindⅢ酶切、纯化,T4连接酶连接,转化大肠杆菌,抗生素筛选重组质粒.结果:(1)得到三个最佳参数为:模板量为2 μl(50.4 μg/ml);Mg2+浓度为2.0 mmol/L;退火温度为55℃.(2)酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入片段的正确性.结论:在此优化条件下经PCR反应得到了特异、高效和忠实的bFGF基因片段,并成功构建了bFGF真核表达载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王捷	广州军区广州总医院骨科	255	1186	14.0	20.0
2	张宏斌	广州军区广州总医院骨科	95	457	11.0	16.0
3	丁焕文	广州军区广州总医院骨科	70	453	12.0	17.0