多种缺损及突变的PrP蛋白在杆状病毒中的表达和纯化

• 作者: 刘勇 周伟 张瑾 张福萍 聂凯 董小平 陈岚
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: PrP 杆状病毒 表达 信号肽
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 人与动物病毒
• 页码范围: 36-41
• 页数: 6页
• 分类号: R373|Q78
• 字数: 3614字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2003.01.008

摘要

PrP蛋白多肽序列上存在有不同的功能区域,影响着蛋白质构象、理化特性和生物学功能.为了获得不同缺损及突变的仓鼠PrP蛋白,以PCR方法获得不同大小的PrP基因片段,利用PCR大引物点诱变法获得带有突变糖基化位点PrP序列.所有PCR产物测序鉴定正确后,分别与pFASTBAC Hb质粒连接,与穿梭载体DH10BAC转座,构建各种重组病毒.Western blot证实,8种不同长度的仓鼠PrP蛋白可在昆虫细胞Sf9中表达,包括全序列的PrP1-231,信号肽缺失的PrP23-231;N端缺损的PrP90-231和PrP120-231;C端缺损的PrP1-199、PrP1-174和PrP1-160.糖基化位点突变:PrP23-231(N181Q).其中不带信号肽序列的PrP蛋白均呈HIS融合蛋白,而N端带有信号肽的PrP蛋白则不能与Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱结合,但可以同PrP特异性抗体发生免疫沉淀反应.这提示PrP信号肽序列在昆虫细胞中可能也发挥着与哺乳动物细胞相似的作用.不同缺损及突变的PrP蛋白的表达和纯化为进行蛋白生物学性状研究奠定了基础.