抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因的克隆及重组表达载体的构建

• 作者: 俞慕华 叶友松 姜立民 戴传文 温群文 黄文繁 黄锐敏
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腮腺炎病毒 RT-PCR 电转化 表达载体
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 146-148,135
• 页数: 4页
• 分类号: R512.1
• 字数: 2242字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3619.2003.02.007

摘要

目的构建抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因重组表达载体.方法从腮腺炎患者和腮腺炎抗体IgG阳性正常人群的淋巴细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA.用相应的引物进行PCR,扩增出轻链和重链Fd段基因,经酶切后分别和噬粒载体pComb3连接,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1-blue菌株,将轻链和重链Fd基因先后克隆入pComb3中.结果从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约110μg,经逆转录、PCR,分别扩增出约700bD大小的κ、λ和Fd基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接,在2.5kv,200Ω,25μF的条件下电转化,最终转化率为:2.48×107.随机挑取电转化后的10个菌落,经PCR鉴定,共有5个克隆同时含有轻链和重链Fd基因,抗体Fab的重组率为50%.结论获得的抗体Fab重组表达载体是高效、实用的,为下一步构建抗腮腺炎病毒噬菌体抗体库打下基础.