毕赤氏酵母/hGM-CSF工程菌的构建及表达分析

• 作者: 周鹏 张泰芳 杨国峰
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: hGM-CSF 毕赤氏酵母 载体构建 表达分析
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 349-352
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3150字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8915.2003.06.003

摘要

为了探索利用毕赤氏酵母系统表达和生产人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony-stimulatingfactor,hGM-CSF)的可行性,使用经改造的hGM-CSF基因构建pGAPZα-A/hGM-CSF分泌型表达载体,转入毕赤氏酵母SMD1168(his 4,pep 4)菌株和GS115(his 4)菌株,利用斑点杂交技术筛选hGM-CSF基因阳性菌株,利用SDS-PAGE和TF-1依赖细胞株/MTT比色法对工程菌株的分泌产物进行表达和生物活性分析,最后筛选得到7个hGM-CSF基因阳性菌株,其中有3个工程菌株的杂蛋白较少且主带蛋白质相对分子质量与经改造的hGM-CSF基因相对分子质量保持一致,这3个工程菌株的分泌蛋白质样品都具有天然hGM-CSF的生物活性,经初步提取,活性单位分别为2.28×105U/ml、2.22×105U/ml和2.46×105U/ml.从而证明利用毕赤氏酵母系统表达hGM-CSF是可行的,为hGM-CSF的生产和临床应用打下了基础.