通过载体DHFR基因的弱化提高抗体在CHO细胞中的表达

• 作者: 俞莉章 吕英谦 周丽君 张海荣 王琰 白银
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 嵌合抗体 二氢叶酸还原酶 CHO细胞 真核表达
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 62-64,67
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 4539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2003.01.021

摘要

目的: 提高抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体在二氢叶酸还原酶缺陷的CHO细胞株(CHO/DHFR )中表达的产量.方法: 对表达载体中DHFR基因表达调控序列进行一系列的删除突变和点突变后, 构建不同的嵌合抗体表达载体.用这些载体转染CHO细胞并以递增量的氨甲喋呤(MTX)筛选, 用ELISA法测定每个加压水平的各组细胞中抗体的表达水平.结果: 通过对表达载体中DHFR基因表达调控序列的突变, 使DHFR的基础表达水平产生了不同程度的弱化.转染CHO细胞后, 可明显提高MTX加压增加抗体表达的效果, 抗体表达水平的增加基本与DHFR基因的弱化程度呈正相关.从弱化程度最高的pWS2-BDI组中, 我们筛选得到表达量达55 μg/(106细胞*24 h)的高表达细胞株, 经锌离子进一步诱导后, 表达量可达100 μg/(106细胞*24 h)以上.结论: 弱化表达载体中DHFR的表达, 可提高MTX对工程抗体表达的增加效果.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王琰	海军总医院中心实验科	59	302	9.0	14.0
2	周丽君	海军总医院中心实验科	37	90	5.0	7.0
3	俞莉章	北京大学第一医院泌尿外科研究所	18	88	6.0	9.0
4	白银	海军总医院中心实验科	7	81	5.0	7.0
6	张海荣	海军总医院中心实验科	14	67	4.0	8.0
7	吕英谦	北京大学第一医院泌尿外科研究所	2	28	2.0	2.0