抗腮腺炎病毒抗体轻链基因的克隆及重组表达载体的构建

• 作者: 俞慕华 叶友松 段永翔 詹希美 陈昭斌 陈辉 黄锐敏
• 来源期刊: 现代预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 腮腺炎病毒 RT-PCR 电转化 表达载体
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 473-474
• 页数: 2页
• 分类号: R117
• 字数: 2315字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-8507.2003.04.006

摘要

目的:构建抗腮腺炎病毒抗体轻链基因重组表达载体.方法:从腮腺炎患者和腮腺炎抗体IgG阳性正常人群的淋巴细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA.用相应的引物进行PCR,扩增出轻链κ和λ基因,经Sac I和Xba I双酶切后,分别和噬粒载体pCornb3连接,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1-blue菌株,将轻链基因克隆入载体pComb3.结果:从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约110μg,经逆转录、PCR,分别扩增出约700bp大小的κ和λ基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接,在2.5kv,200Ω,25μF的条件下电转化,转化率为:4.14×107,随机挑取10个菌落进行PCR鉴定,共有6个克隆扩增出κ基因,1个克隆扩增出λ基因,轻链重组率为70%.结论:获得的抗体轻链基因重组表达载体是高效、实用的,为下一步构建抗体Fab段基因重组载体打下了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	詹希美	中山医学院病原生物学部	1	0	0.0	0.0