BSA-Y-DOTA免疫噬菌体Fab抗体库的构建及鉴定

• 作者: 宋斐 张思河 杨向民 邢金良 陈志南
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 钇-十二烷四乙酸 噬菌体展示 ab 抗体库
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 476-479
• 页数: 4页
• 分类号: R383.24
• 字数: 3447字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2003.05.020

摘要

目的:构建钇-十二烷四乙酸(Y-DOTA)免疫噬菌体Fab抗体库.方法:将牛血清白蛋白(BSA)与DOTA交联,并与金属Y鳌合制备成BSA-Y-DOTA,用其免疫BALB/c小鼠.检测抗血清的滴度后,分离抗体阳性的小鼠脾淋巴细胞,提取总RNA.利用RT-PCR扩增全套重链Fd和轻链基因,依次插入经改造的噬菌体载体pComb3M的相应酶切位点,构建成Fab噬菌体抗体库.用酶切、序列测定及ELISA等方法,对重组率、多样性及Fab的展示情况进行鉴定.结果:成功得制备了BSA-Y-DOTA交联物,并获得较好的免疫效果.免疫小鼠的全套重链Fd片段和轻链均得到正确扩增;d片断和轻链基因均插入到载体pComb3M中;ab抗体库的库容量达8×107;重组率约为90%,且具有良好的抗体基因多样性.另外,Fab片段也被展示于噬菌体表面.结论:成功地构建了半抗原Y-DOTA的Fab噬菌体抗体库,为筛选Y-DOTA特异性抗体奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈志南	第四军医大学细胞工程研究中心	114	603	12.0	18.0
2	邢金良	第四军医大学细胞工程研究中心	35	135	8.0	9.0
3	张思河	第四军医大学细胞工程研究中心	23	106	6.0	9.0
4	杨向民	第四军医大学细胞工程研究中心	25	102	6.0	8.0
5	宋斐	第四军医大学细胞工程研究中心	6	13	2.0	3.0