人CD226 (PTA1)分子胞膜外区截短体真核表达载体的构建、表达及其识别结构域的分析

• 作者: 刘雪松 宁双飞 张新海 张赟 朱勇 李琦 杨琨 欧阳为明 贾卫 金伯泉
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CD226 PTA1 截短体 基因表达
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 9-13
• 页数: 5页
• 分类号: R392
• 字数: 4094字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2003.01.004

摘要

目的确定一套CD226单克隆抗体(McAb)识别CD226分子胞膜外区结构域的部位. 方法应用计算机软件分析CD226分子蛋白质序列疏水性,确定其亲水性区域.采用PCR方法扩增CD226分子基因序列,分别缺失相应亲水性区域,构建CD226截短体重组真核细胞表达载体pcDNA3-PTA1T1和pcDNA3-PTA1T2.测序正确后,转染COS7细胞,抗CD226分子多克隆抗体间接免疫荧光染色,流式细胞术检测CD226分子截短体的表达.表达成功后,采用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析,用一套CD226 McAb检测与截短突变体的免疫反应性,从而确定CD226 McAb识别CD226分子结构域的部位. 结果 PCR扩增出CD226分子相应目的片段序列,定向克隆入pcDNA3真核表达载体,DNA序列测定正确.转染COS7细胞后,流式细胞术检测CD226截短体分子有较高水平的表达.CD226 McAb Leo A1、New E1和FMU1～7均可识别CD226全长分子;Leo A1、New E1、FMU1、FMU2、FMU4和FMU5与截短突变体PTA1T1和PTA1T2均无反应性;FMU3可结合PTA1T1分子,不结合PTA1T2分子;FMU6和FMU7均可结合PTA1T1及PTA1T2分子. 结论 CD226 McAb Leo A1、New E1、FMU1、FMU2、FMU3、FMU4和FMU5识别CD226分子胞膜外区D1结构域,其中FMU3识别的位点位于V1和V2环之间;FMU6和FMU7识别D2结构域.