人重组CD137-Fc分子的构建与真核表达

• 作者: 姜曼 白云 黄钢 黎万玲
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 人CD137 CD137-Fc 真核表达
• 年，卷（期）: 2003,（24）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 2185-2188
• 页数: 4页
• 分类号: R394.3|Q781
• 字数: 3413字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5404.2003.24.008

摘要

目的构建人CD137-Fc基因的真核表达质粒,并表达有生物学活性的纯化人CD137-Fc融合蛋白.方法从cDNA文库中用PCR扩增CD137全长编码基因,并导入真核表达载体pcDNA3中.测序证实后,继续用PCR扩增其膜外区cDNA,,酶切后与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中,转染293T细胞瞬时表达,用夹心ELISA检测其表达情况,经蛋白A亲和纯化,用SDS-PAGE与免疫印迹进行鉴定.结果测序证实构建的CD137与CD137-Fc cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;ELISA证实CD137-Fc蛋白的表达;SDS-PAGE与免疫印迹证实其为人CD137-Fc蛋白.结论获得了纯化的hCD137-Fc融合蛋白,为探讨CD137在免疫自稳调节中的地位,以及探索CD137的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础.