结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤酵母中的融合表达及其活性研究

• 作者: 刘林 宋大新 王洪海 赵志安
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: ESAT-6蛋白 人α-2a干扰素 分泌型载体 酵母SMD1168 融合表达
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 生物制药
• 页码范围: 958-962
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4760字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.06.028

摘要

为了获得结核分枝杆菌ESAT-6蛋白在毕赤氏酵母中的高效表达,将人α-2a干扰素基因、结核分枝杆菌esat-6基因经PCR扩增并加上相应的酶切位点,两基因之间的DNA接头编码肠激酶识别的多肽,DNA经酶切连接插入分泌型载体pPIC9K,将重组表达质粒pPIC9K-α2a-esat6用Sal Ⅰ单酶切之后,电击转入Pichia pastoris SMD1168中,采用G418梯度筛选获得高抗性转化子.以甲醇作为诱导物,发酵4d后取上清,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定并分析表达产物的干扰素活性.结果表明,重组菌株成功地分泌表达了分子量大小约为30kD的融合蛋白,表达产物不仅具有较高的干扰素活性,而且可以和结核病人血清发生特异性结合,为结核病的特异性诊断和结核病新型疫苗的研制打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王洪海	复旦大学生命科学学院	97	667	13.0	21.0
2	刘林	复旦大学生命科学学院	8	160	4.0	8.0
3	赵志安	复旦大学生命科学学院	6	60	3.0	6.0
4	宋大新	复旦大学生命科学学院	11	43	4.0	6.0