硫氧还蛋白-(His)6融合的瑞替普酶的表达、纯化和活性检测

• 作者: 孙石静 廖建民 张新元 沈子龙
• 来源期刊: 中国药科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 硫氧还蛋白 (组氨酸)6标签 瑞替普酶 融合蛋白 表达 纯化 活性
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 374-378
• 页数: 5页
• 分类号: R943
• 字数: 497字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-5048.2004.04.023

摘要

目的:构建硫氧还蛋白-(His)6-瑞替普酶融合表达载体,提高瑞替普酶在大肠杆菌中的表达量,简化rPA的分离纯化.方法:将rPA基因克隆于原核表达载体pET32a硫氧还蛋白-(组氨酸)6标签下游,在大肠杆菌BL21(DE3)中用乳糖进行诱导表达.采用一步稀释法对融合蛋白体外复性后,使用Ni2+亲和层析柱,对包涵体复性液进行初步纯化.采用体外溶圈法对复性后和纯化后的融合蛋白进行生物活性的测定.结果:得到分子量约为56 kDa的融合蛋白,表达量达到总蛋白的30%以上.比本实验室构建的非融合表达载体表达量提高了约50%.经过一步Ni2+亲和层析,融合蛋白纯度达到80%以上.体外溶圈法实验表明融合蛋白复性后和纯化后具有溶栓活性.结论:与非融合表达相比,融合表达的表达量明显提高.即使N端额外融合一段融合多肽,rPA仍然具有生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈子龙	中国药科大学生物制药学院	86	688	11.0	23.0
2	孙石静	中国药科大学生物制药学院	5	26	4.0	5.0
3	廖建民	中国药科大学生物制药学院	27	390	7.0	19.0
4	张新元	中国药科大学生物制药学院	7	44	5.0	6.0