人IL-1RⅡ基因的克隆及其表达

• 作者: 刘嘉茵 卢春 王淑玉 胡艳秋
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白表达 人IL-1RⅡ基因 基因克隆
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 195-198
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 3096字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2004.02.020

摘要

目的:克隆人IL-1RⅡ基因,构建其逆转录病毒载体,以探讨其在IL-1主导疾病中的作用.方法:用RT-PCR法从人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆人的IL-1RⅡ基因.将其克隆到原核表达质粒PET22b中,构建重组质粒PET22b-IL-IRⅡ.将该重组质粒依次进行PCR、酶切鉴定及测序后,转化BL21菌,以IPTG诱导表达.表达产物用Western blot鉴定.另外,将以酶切重组质粒PET22b-IL-1 RⅡ所获IL-1 RⅡ基因的全长ORF,克隆到逆转录病毒质粒中并转染293细胞,用免疫组化染色法检查IL-1RⅡ基因的表达.结果:用RT-PCR法,从人PBMC中扩增出1 203 bp的cDNA,测序证实为人IL-1RⅡ基因.Western blot表明,重组质粒可表达IL-1RⅡ蛋白.免疫组化染色表明,IL-1RⅡ重组逆转录质粒可在293细胞中高效表达IL-IRⅡ蛋白.结论:成功地克隆了人IL-1RⅡ基因,构建了其原核表达载体和重组逆转录病毒载体,并在BL21菌中表达IL-1RⅡ重组蛋白,为进一步研究IL-1RⅡ基因在相关疾病中的作用创造了有利条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王淑玉	南京医科大学第一附属医院妇产科	51	247	8.0	11.0
2	胡艳秋	南京医科大学第一附属医院妇产科	10	12	2.0	2.0
3	刘嘉茵	南京医科大学第一附属医院妇产科	241	1685	19.0	30.0
4	卢春	南京医科大学微生物学与免疫学教研室	92	236	7.0	9.0