猪Ⅱ型圆环病毒ORF1基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 宋长绪 王贵平 蒋智勇 赵亚华 高向阳
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: PCV2 ORF1 克隆 大肠杆菌表达
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 59-62
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.2
• 字数: 2389字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2004.05.018

摘要

根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)ORF1基因序列,设计合成了-对引物,对PCV2广东株(GD)ORF1基因进行PCR扩增,将扩增出的ORF1基因(942 bp)克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒,命名为pMD-ORF1.将ORF1的Kpn工和Xba Ⅰ双酶切产物插入原核表达载体pBAD/gⅢC,得到重组子,命名为pBAD/gⅢ-ORF1.测序分析表明克隆的ORF1与德国分离株AF201897核苷酸序列同源性高达99.5%.与其它PCV2核苷酸序列同源性为92.1%～99.9%,推导的氨基酸序列同源性为90.2%～99.5%.同时,测序结果表明所克隆的ORF1准确插入pBAD/gⅢC的多克隆位点,未改变读码框架.用L-Arabinose进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western blotting分析,显示PCV2 ORF1在pBAD/gⅢC中获得了高效融合表达,其表达蛋白分子量约为4.1万.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	宋长绪	广东省农科院兽医研究所	66	587	13.0	20.0
2	高向阳	华南农业大学生命科学院	47	579	13.0	23.0
3	王贵平	广东省农科院兽医研究所	58	637	14.0	22.0
4	蒋智勇	广东省农科院兽医研究所	15	107	6.0	10.0
8	赵亚华	华南农业大学生命科学院	31	339	9.0	17.0