抗人精浆蛋白单克隆抗体Fab段基因的克隆及其在大肠杆菌的表达

• 作者: 于翠娟 孙脊峰 杨安钢 杨洁 王成济 许彦鸣 赵晶 郝晓柯 金明
• 来源期刊: 免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人精浆蛋白 单克隆抗体 Fab段 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 310-312,316
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2903字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-8861.2004.04.019

摘要

目的获得鼠抗人精浆蛋白单克隆抗体Fab段基因并在大肠杆菌中表达.方法从分泌抗人精浆蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系E4\B7中提取总RNA,用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)克隆Fd段和κ链基因;构建到噬粒pComb3中;并用ELISA、Western blotting和免疫细胞化学分析证明表达的Fab段特异性结合人精浆蛋白.结果从分泌抗人精浆蛋白的鼠单克隆抗体杂交瘤细胞系E4B7中克隆出了重链Fd段和κ链基因,经序列测定表明,Vx属于鼠免疫球蛋白XⅢ家族,VH与鼠免疫球蛋白MUSIGHAEI同源性最高.将该Fd和κ链基因克隆到表达载体pComb3中,在大肠杆菌中获得了表达.结论 ETISA、Western blotting和免疫细胞化学分析表明,表达的Fab段可以特异性的与人精浆蛋白结合.